Разработка технологии пцр в реальном времени для экспресс-определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам резервного ряда: фторхинолонам, амикацину и капреомицину
Аннотация
На основе технологии ПЦР в реальном времени с использованием системы оригинальной конструкции аллель-специфичных, меченных флурофорами праймеров, комплементарных к последовательности гасителя флюоресценции, разработаны метод и опытные образцы тест-системы для быстрого определения ДНК мутаций микобактерий туберкулеза (МБТ), ответственных за лекарственную устойчивость к препаратам резервного ряда: группы фторхинолонов, амикацину и капреомицину. При использовании молекулярно-генетической тест-системы «Амплитуб-МЛУ-РВ» с целью исследования лекарственной чувствительности исследованы образцы мокроты 68 больных с деструктивным туберкулезом легких, длительно лечившихся препаратами 1-го и 2-го рядов (53 пациента). В 51 (75%) случае эти пациенты выделяли МБТ с МЛУ. Все полученные образцы ДНК МБТ были также исследованы на обнаружение лекарственной устойчивости к фторхинолонам, амикацину и капреомицину как с использованием разработанного метода и опытного набора реагентов, так и с помощью традиционного культурального исследования. При использовании молекулярно-генетического анализа был установлен 90%-ный уровень чувствительности исследования при 96%-ной специфичности.
Об авторах
Ю. С. Аляпкина
НПФ «Синтол»; НИИ фтизиопульмонологии ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И. М. Сеченова»
Россия
Россия
Я. И. Алексеев
НПФ «Синтол»
Россия
Россия
Д. А. Варламов
НПФ «Синтол»
Россия
Россия
Л. В. Домотенко
НИИ прикладной микробиологии Роспотребнадзора РФ, г. Москва
Россия
Россия
Л. К. Шипина
НИИ фтизиопульмонологии ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И. М. Сеченова»
Россия
Россия
М. А. Владимирский
НИИ фтизиопульмонологии ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И. М. Сеченова»
Россия
127994, г. Москва, ул. Достоевского, д. 4
Россия
127994, г. Москва, ул. Достоевского, д. 4
Список литературы
1. Владимирский М. А., Аляпкина Ю. С., Алексеев Я. И. и др. Применение метода ПЦР в реальном времени для определения и контроля за распространением лекарственно-устойчивых штаммов микобактерий туберкулеза // Пробл. туб. - 2008. - № 4. - С. 38-44.
2. Cheng A. F. B., Yew W. W., Chan E. W. C. et al. 2004. Multiplex PCR amplimer conformation analysis for rapid detection of gyrA mutations in fluoroquinolone-resistant Mycobacterium tuberculosis clinical isolates // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. - Vol. 48, № 2. - P. 596-601.
3. Guidelines for clinical and operational management of drug-resistant tuberculosis, Paris, France, 232 p.
4. Maus C. E., Plikaytis B. B., Shinnick T. M. 2005. Molecular analysis of cross-resistance to capreomycin, kanamycin, amikacin, and viomycin in Mycobacterium tuberculosis // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. - Vol. 49, № 8. - P. 3192-3197.
5. Suzuki Y., Katsukawa C., Tamaru A. et al. 1998. Detection of kanamycin-resistant Mycobacterium tuberculosis by identifying mutations in the 16S rRNA gene // J. Clin. Microbiol. - Vol. 36, № 5. - P. 1220-1225.
6. van Belkum А., Dunne W. M. Next-generation antimicrobial susceptibility testing // J. Clin. Microbiology. - 2013. - Vol. 51, № 7. - P. 2018-2023.
Рецензия
Для цитирования:
Аляпкина Ю.С., Алексеев Я.И., Варламов Д.А., Домотенко Л.В., Шипина Л.К., Владимирский М.А. Разработка технологии пцр в реальном времени для экспресс-определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам резервного ряда: фторхинолонам, амикацину и капреомицину. Туберкулез и болезни легких. 2014;(12):69-75.
For citation:
Alyapkina Yu.S., Alekseev Ya.I., Varlamov D.A., Domotenko L.V., Shipina L.K., Vladimirsky M.A. Development of real-time pcr technology for the rapid detection of mycobacterium tuberculosis resistance to reserve antituberculosis drugs: fluoroquinolones, amikacin, and capreomycin. Tuberculosis and Lung Diseases. 2014;(12):69-75. (In Russ.)
Просмотров: 774
Послать статью по эл. почте 